產(chǎn)品介紹

經(jīng)典豬瘟液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒            

 使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：經(jīng)典豬瘟液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒

【規(guī)格】96T×2塊

【用途】

檢測(cè)豬血清中的經(jīng)典豬瘟抗體，適用于動(dòng)物疫苗免疫抗體監(jiān)測(cè)等。

【儲(chǔ)藏與有效期】2～8℃保存，有效期12個(gè)月。

 

【主要組份】 

序號(hào)	組份名稱	數(shù)量
1	抗原包被板	96T×2塊
2	HRP-單抗	12mL×1瓶
3	樣品稀釋液	20mL×1瓶
4	陰性對(duì)照	1.0mL×1管
5	陽性對(duì)照	1.0mL×1管
6	底物AB	12mL×2瓶
7	終止液	12mL×1瓶
8	濃縮洗滌液(20×)	50mL×1瓶
9	說明書	1份

【試驗(yàn)操作】

1、洗滌液配制 

將濃縮洗滌液(20×)用蒸餾水或去離子水稀釋成洗滌液(1×)，即1份濃縮洗滌液加入19份蒸餾水，配制的洗滌液(1×)作為洗板用。

 

2、定性檢測(cè)方案(單孔定性，每板檢測(cè)92份血清樣本)

 

【操作步驟】

2.1加樣:設(shè)陰性對(duì)照血清(A1B1)和陽性血清(C1D1)各2孔，直接加入50ul/孔對(duì)照血清；其它為被檢樣品孔，預(yù)先在相應(yīng)孔內(nèi)加入45ul的稀釋液，接著加入5ul/孔待檢血清；最后，在所有孔內(nèi)均加入50ul的HRP-單抗，被檢血清即為1：20稀釋。振蕩，混勻，37℃溫育30分鐘。

2.2TMB底物：用洗滌液洗板3遍，最后一次拍干，加入TMB底物，50ul/孔，37℃溫育15分鐘。

2.3反應(yīng)終止： 加入終止液，50ul/孔，終止反應(yīng)。

2.4讀值：酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)讀數(shù)。

 

【計(jì)算方法】

2.5阻斷率計(jì)算

陰性對(duì)照平均值=（OD_-A1+OD_-B1）/2;

陽性對(duì)照平均值=（OD_+C1+OD_+D1）/2;

樣品阻斷率 PI=[（陰性對(duì)照平均值-樣品OD值）/陰性對(duì)照平均值]×100%

根據(jù)以上公式計(jì)算被檢樣品和陽性對(duì)照樣品的阻斷率。

   2.6試驗(yàn)成立

    兩孔陰性對(duì)照OD450nm值至少一孔OD值大于0.5；兩孔陽性對(duì)照至少一孔的阻斷率大于60%。

【結(jié)果判定】

被檢樣品PI≥50%判為口蹄疫病毒O型抗體陽性；PI＜50%判為口蹄疫病毒O型抗體陰性。

 

3、定量檢測(cè)方案(每板檢測(cè)10或20份血清樣本)

 

在使用前，所有的試劑盒組份應(yīng)恢復(fù)到室溫。試劑應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)或振蕩混勻。每個(gè)樣品使用一個(gè)單獨(dú)的吸頭。

3.1樣品稀釋: 取出抗原包被板，根據(jù)不同的需要，選擇圖1或圖2中的一種布局進(jìn)行操作。圖1為可檢測(cè)10份樣品布局圖；圖2為可檢測(cè)20份樣品布局圖。每次試驗(yàn)，每板均需設(shè)置陰陽性血清對(duì)照及4孔不加血清單抗對(duì)照。

以圖1為例操作，A1～A10每孔各加75μL的稀釋液，其它所有孔內(nèi)各加入50μL的稀釋液。A1～A10每孔各加25μL的待檢樣品，A11孔加50μL的陽性對(duì)照，A12孔加50μL的陰性對(duì)照，用排槍吹打混勻（每孔吹打3～5次），待檢樣品A1～A10分別以50μL/孔的量從A到H連續(xù)2倍稀釋；陽性對(duì)照A11以50μL/孔的量從A到H連續(xù)2倍稀釋；陰性對(duì)照A12以50μL/孔的量從A到B連續(xù)2倍稀釋。待檢樣品在第1～10列從1:4稀釋至1:512；陽性對(duì)照，從1:2稀釋至1:256，由于試劑盒提供的陽性對(duì)照已1:4稀釋，則變?yōu)閺?/span>1:8稀釋至1:1024；陰性對(duì)照，從1:2稀釋至1:4。

3.2 加入HRP－單抗：樣品稀釋好后，在所有孔內(nèi)加入50ul的HRP－單抗，反應(yīng)體系即為100μL/孔。加樣完畢后，所有稀釋度翻倍，待檢樣品從1:8～1:1024，陽性對(duì)照從1:16～1:2048，陰性對(duì)照從1:4～1:8，貼封板膜，振蕩混勻。將加好樣的ELISA反應(yīng)板置于37℃溫育30分鐘。

3.3洗板：用230μL（±20μL）洗滌液(1×)洗滌板孔，共洗滌3次。每次洗滌后應(yīng)棄去孔內(nèi)的液體。在最后一次洗滌液棄去后，將孔中殘留的洗滌液拍干。按50μL/孔加入TMB底物，37℃避光溫育10～15min。

3.4讀值： 每孔再加50μL終止液終止反應(yīng)，立即在450nm波長(zhǎng)下讀取OD值。

 

圖1  96孔板檢測(cè)10份樣品布局圖

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

S1 1:8

S2

S3

S4

S5

S6

S7

S8

S9

S10

1:16

1:4

B

1:16

1:32

1:8

C

1:32

1:64

空白

D

1:64

1:128

空白

E

1:128

1:256

不加血清單抗 對(duì)照

F

1:256

1:512

G

1:512

1:1024

H

1:1024

1:2048

 

圖2  96孔板檢測(cè)20份樣品布局圖

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

S1 1:16

S2

S3

S4

S5

S6

S7

S8

S9

S10

1:16

1:4

B

1:32

1:32

1:8

C

1:64

1:64

空白

D

1:128

1:128

空白

E

S11 1:16

S12

S13

S14

S15

S16

S17

S18

S19

S20

1:256

不加血清單抗 對(duì)照

F

1:32

1:512

G

1:64

1:1024

H

1:128

1:2048

 

【結(jié)果分析】

3.5試驗(yàn)成立判斷

不加血清單抗對(duì)照OD值應(yīng)在2.0±1.5范圍內(nèi)；

陽性對(duì)照抗體效價(jià)不低于1:1024±1滴度；

陰性對(duì)照抗體效價(jià)應(yīng)＜1:8。

3.6結(jié)果判定

不加血清單抗對(duì)照4孔，棄去最高和最低OD值，計(jì)算剩余2孔的平均OD值，再除以2，即得50%對(duì)照值，該值即為臨界值，表示阻斷50％反應(yīng)的對(duì)照OD值。待檢樣品OD值＞臨界值，判為陰性孔；待檢樣品OD值≤臨界值，判為陽性孔。每份待檢樣品系列梯度稀釋中，陽性孔的最高稀釋倍數(shù)即為該待檢樣品的抗體效價(jià)。若臨界值處于兩個(gè)稀釋孔OD值之間，抗體效價(jià)取相鄰陽性孔和陰性孔稀釋倍數(shù)的反對(duì)數(shù)中間值。如臨界值處于1:64（反對(duì)數(shù)值為1.8）與1:128（反對(duì)數(shù)值為2.1）之間，則判定該份待檢樣品的抗體效價(jià)為1:90（反對(duì)數(shù)值為1.95）。

抗體效價(jià)≥64，為疫苗免疫合格。

抗體效價(jià)計(jì)算對(duì)照表（反對(duì)數(shù)值）

抗體效價(jià)	Log10(效價(jià)) 對(duì)照計(jì)算	抗體效價(jià)	Log10(效價(jià)) 對(duì)照計(jì)算	抗體效價(jià)	Log10(效價(jià)) 對(duì)照計(jì)算
1:4	0.6	1:32	1.5	1:256	2.4
1:6	0.75	1:45	1.65	1:360	2.55
1:8	0.9	1:64	1.8	1:512	2.7
1:11	1.05	1:90	1.95	1:720	2.85
1:16	1.2	1:128	2.1	1:1024	3
1:22	1.35	1:180	2.25	1:1440	3.15

 

4、注意事項(xiàng)

4.1 為使您的實(shí)驗(yàn)獲得正確結(jié)果，請(qǐng)您在實(shí)驗(yàn)前仔細(xì)閱讀本說明書。

4.2 所有試劑使用前恢復(fù)至室溫(18～26℃)，以免溫度過低影響抗原抗體反應(yīng)。

4.3實(shí)驗(yàn)前應(yīng)用溫度計(jì)檢查溫箱溫度，溫度過高或過低影響OD值高低。

4.4 包被板反應(yīng)時(shí)嚴(yán)禁堆疊放置，應(yīng)該平鋪且板間有空隙，不要離溫箱壁太近。

4.5實(shí)驗(yàn)所用移液器及設(shè)備應(yīng)定期校準(zhǔn)。

4.6采集的樣品要新鮮，并且最好不要溶血。血清標(biāo)本在2～8℃放置不要超過2天，室溫不超過8小時(shí)，如需長(zhǎng)時(shí)間放置應(yīng)儲(chǔ)存于-20℃。 

• 植物RNA核酸免提取試劑盒
• 植物RNA核酸免提取試劑盒（高產(chǎn)量）
• 植物RNA核酸免提取試劑盒（多糖多酚類）
• 植物DNA核酸免提取試劑盒
• 植物DNA核酸免提取試劑盒（高產(chǎn)量）
• 植物DNA核酸免提取試劑盒（多糖多酚類）
• 血液RNA核酸免提取試劑盒
• 血液DNA核酸免提取試劑盒
• 細(xì)胞和組織RNA核酸免提取試劑盒
• 細(xì)胞和組織DNA核酸免提取試劑盒
• 細(xì)胞RNA核酸免提取試劑盒
• RNA核酸免提取試劑盒
• DNA核酸免提取試劑盒
• DNA和RNA核酸免提取試劑盒
• 硼砂快速檢測(cè)試劑盒
• 甲醛快速檢測(cè)試劑盒
• 甲醇快速檢測(cè)試劑盒
• 二氧化硫快速檢測(cè)試劑盒
• 吊白塊快速檢測(cè)試劑盒
• 禽白血病病毒抗原ELISA批量?jī)艋瘷z測(cè)試劑盒
• 辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體蛋白試劑盒
• 豬藍(lán)耳病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒使用說明書96X2
• 小鼠抗血清ELISA效價(jià)測(cè)定檢測(cè)試劑盒
• 小鵝瘟病毒PCR檢測(cè)試劑盒
• 犬細(xì)粒棘球絳蟲抗原ELISA試劑盒
• 牛羊口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒
• 兔子抗血清ELISA效價(jià)測(cè)定檢測(cè)試劑盒