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小鵝瘟病毒PCR檢測試劑盒

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產品介紹

    【用途】 用于小鵝瘟病毒核酸的檢測。

    試劑

    編號

    20T

    50T

    保存

    裂解液

    4mL

    10mL

    室溫

    A

    無水乙醇

    4mL

    10mL

    室溫

    去蛋白漂洗液

    12mL

    28mL

    室溫

    洗滌液

    32mL

    77mL

    室溫

    洗脫液

    2mL

    5mL

    室溫

    蛋白酶K

    0.2mL

    0.5mL

    -20

    B

    PCR反應液

    200μL

    500μL

    -20

    引物

    40μL

    100μL

    -20

    陽性對照

    30μL

    30μL

    -20

    陰性對照

    300μL

    300μL

    -20

    DL2000 DNA Marker

    20μL

    50μL

    -20

    【操作步驟】

    1.樣本前處理及核酸提取  

    樣本前處理:

    取適量病料心、肝、腸等組織,于滅菌研缽充分研磨,用PBS按照13體積稀釋成均勻乳劑,10 000rpm離心3 min

    核酸提取:

    (1)取200μL上述樣本離心后上清液和10μL蛋白酶K加入一只新的1.5mL離心管,然后加入200μL裂解液,劇烈振蕩。(蛋白酶K開蓋使用后建議存于2-8)混勻5~10秒。

    (2)56℃溫浴10分鐘。

    (3)在上述離心管中加入200μL無水乙醇,充分振蕩混勻5~10秒。

    (4)將步驟3中混勻的液體轉移至一只套有收集管的純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,棄去套管內液體。

    (5)將500μL去蛋白漂洗液加入純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,并棄去套管內液體。

    (6)將700μL洗滌液加入純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,并棄去套管內液體。

    (7)可選:重復步驟(6)。

    (8)再將純化柱放回接液管上,13 000rpm離心1分鐘。

    (9)將純化柱移到一只干凈的1.5mL離心管中。

    (10)向離心柱內加50μL洗脫液,室溫靜置1分鐘后12 000rpm離心1分鐘,棄純化柱,離心管內液體中含有基因組DNA。提純的基因組DNA如果不立即使用,請保存于-20℃。

    2. PCR加樣體系(總體系20 μL將下列試劑加入PCR反應管中。

【僅供科學研究使用】

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