DON 嘔吐毒素單抗對小鼠嘔吐毒素中毒解毒試驗
1 材料與方法
1.1 試驗動物
健康昆明系小白鼠6只，體重18g±2g。
1.2 主要試劑
黃曲霉毒素標準品(DON 嘔吐毒素)、抗DON 嘔吐毒素-B6單抗(稀釋倍數為1:64W時，OD值為1.02。)
1.3 試驗動物分組
將健康小鼠飼養觀察兩周后，隨機分成A、B、C共3組，A組為空白對照組(2只)；B組為試驗對照組(2只)，即僅注射黃曲霉毒素標準品；C組為試驗組(2只)，注射黃曲霉毒素標準品+注射黃曲霉毒素單抗。
1.4 小鼠DON 嘔吐毒素中毒試驗和解毒實驗
1.4.1 A組：小鼠不做任何處理，只按常規方法喂養，每天觀察一次常規指標(進食、體重、精神、運動情況)。
1.4.2 B組、C組：試驗第1天，100μl DON 嘔吐毒素 1mg/ml+400μl生理鹽水，取100μl靜脈注射到18g左右昆明鼠尾部。即注射劑量為20μg DON 嘔吐毒素/18g。
試驗第7天，150μl DON 嘔吐毒素 1mg/ml+350μl生理鹽水，取100μl靜脈追加注射到18g左右昆明鼠尾部。即注射劑量為30μg DON 嘔吐毒素/18g。
1.4.3 C組：C組小鼠出現中毒癥狀后，當日尾靜脈注射抗黃曲霉毒素(DON 嘔吐毒素)單抗(30μl DON 嘔吐毒素-B6+270μl生理鹽水，取100μl靜脈注射)，以后每天觀察一次常規指標(進食、體重、精神、運動情況)，直至小鼠恢復正常的生理狀況。
1.5 檢測方法
1.5.1 臨床癥狀觀察 每天觀察各組小鼠的采食、飲水、精神、糞便、被毛、運動等臨床表現。
1.5.2 體重稱量 每天各組小鼠給水量相同，共飼喂14天，每天稱重1次。
2 小鼠DON 嘔吐毒素中毒和解毒的結果
小鼠DON 嘔吐毒素中毒和解毒的結果見表1。
表1 小鼠中毒解毒試驗結果
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項目 |
A組(對照組) |
B組(DON 嘔吐毒素試驗對照組) |
C組(DON 嘔吐毒素試驗組) |
備注 |
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第1天 注射毒素 |
① 16.0g/只; ② 16.8g/只。 進食正常,精神正常。 |
① 18.0g/只; ② 16.0g/只。 進食正常,精神正常, 行動迅速。 尾靜脈注射20μg DON 嘔吐毒素/只。 |
① 16.7g/只; ② 16.5g/只。 進食正常,精神正常, 動迅速。 尾靜脈注射20μg DON 嘔吐毒素/只。 |
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第2天 |
① 16.4g/只; ② 17.2g/只。 進食正常,精神正常。 |
① 18.3g/只; ② 16.2g/只。 進食減少,精神正常, 行動迅速。 |
① 16.3g/只; ② 16.5g/只。 進食減少,精神正常, 動迅速。 |
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第3天 |
① 17.5g/只; ② 18.0g/只。 進食正常,精神正常。 |
① 19.0g/只; ② 16.5g/只。 進食減少,精神正常, 行動迅速。 |
① 16.5g/只; ② 16.7g/只。 進食減少,精神正常, 動迅速。 |
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第4天 |
① 18.4g/只; ② 18.6g/只。 進食正常,精神正常。 |
① 19.7g/只; ② 17.0g/只。 進食減少,精神正常, 行動迅速。 |
① 17.0g/只; ② 17.3g/只。 進食減少,精神正常, 動迅速。 |
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第5天 |
① 19.1g/只; ② 19.2g/只。 進食正常,精神正常。 |
① 20.2g/只; ② 18.5g/只。 進減少,精神正常, 行動迅速。 |
① 17.5g/只; ② 18.6g/只。 進食減少,精神正常, 行動迅速。 |
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第6天 |
① 20.0g/只; ② 20.2g/只。 進食正常,精神正常。 |
① 20.2g/只; ② 19.5g/只。 進食減少,精神正常, 行動迅速。 |
① 17.6g/只; ② 19.4g/只。 進食減少,精神正常, 行動迅速。 |
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第7天 追加毒素 |
① 20.2g/只; ② 20.4g/只。 進食正常,精神正常。 |
① 21.0g/只, ② 20.2g/只, 進食減少,精神正常, 行動迅速。 追加30μg DON 嘔吐毒素/只昆明鼠。 |
① 18.0g/只; ② 20.3g/只。 進食減少,精神正常, 行動迅速。 追加30μg DON 嘔吐毒素/只昆明鼠。 |
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第8天 |
① 20.3g/只; ② 20.8g/只。 進食正常,精神正常。 |
① 19.8g/只。 進食大大減少,精神低迷, 行動遲緩。 ② 24h死亡。 |
① 16.9g/只; ② 20.1g/只。 進食減少,精神低迷, 行動遲緩。 |
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第9天 注射DON 嘔吐毒素單抗 |
① 20.4g/只; ② 21.8g/只。 進食正常,精神正常。 |
① 48h死亡。
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① 16.3g/只; ② 19.6g/只。 進食減少,精神低迷, 行動緩慢。 尾靜脈注射DON 嘔吐毒素單抗。 |
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第10天 |
① 20.9g/只; ② 22.4g/只。 進食正常,精神正常。 |
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① 16.3g/只; ② 19.6g/只。 進食減少,精神正常, 行動迅速。 |
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第11天 |
① 21.0g/只; ② 22.8g/只。 進食正常,精神正常。 |
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① 16.8g/只; ② 20.1g/只。 進食正常,精神正常, 行動迅速。 |
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第14天 |
① 21.0g/只; ② 22.8g/只。 進食正常,精神正常。 |
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① 19.0g/只; ② 22.2g/只。 進食正常,精神正常, 行動迅速。 |
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3 結論
3.1 小鼠DON 嘔吐毒素中毒的結果
試驗對照組、試驗組小鼠注射DON 嘔吐毒素后，結果見表1。空白對照組小鼠在試驗期間各指標一直正常，試驗對照組與試驗組小鼠第一次給毒20μg DON 嘔吐毒素/16g小鼠，第2-7天中出現輕度中毒癥狀，即食欲不振，體重增速減緩。追加劑量30μg DON 嘔吐毒素/18g小鼠后第2天即出現重度中毒癥狀，即食欲減退、精神低迷、行動減緩，體重降低，嚴重者1-2天內死亡。表明小鼠中毒劑量在20~50μg之間。
3.2小鼠DON 嘔吐毒素解毒的結果
試驗組小鼠出現中毒癥狀后2天，進行解毒即注射10μl抗DON 嘔吐毒素-B6單抗/只小鼠，第2天即出現解毒癥狀，精神恢復正常，行動自如，體重不再減少。解毒后第3天體重增加，第4天增重明顯，恢復正常，精神良好，行動迅速。表明DON 嘔吐毒素單抗治療效果明顯，見效快。注射10μl單抗劑量也較合適。