豬瘟蛋白(CSFV)熒光實驗步驟
發布時間：2016-07-12 點擊數：3052
1.st細胞鋪96孔板一個。（用無血清培養基稀釋病毒）
2.（一）病毒過濾無菌后，將三株單抗6d6,12f3,14e6，分別稀釋1k倍，2k倍，2k倍，（可以先將抗體稀釋十倍即10ul抗體加90ul培養基；再將10ul加入2ml豬瘟病毒中），共四個樣，（原毒，原毒加6d6，原毒加12f3，原毒加14e6）。
（二）病毒稀釋十倍后，按照上述步驟將抗體同樣分別稀釋，共四個樣，混勻待用。（原毒稀釋10倍，原毒稀釋10倍加6d6，原毒10倍加12f3，原毒10倍加14e6）
3.將貼壁后的96孔上清棄掉，加入上面8個樣30ul/孔，各四個重復，吸附1h。
4.補液50ul/孔。2%st培養基。
5.96h一收并補液100ul/ 孔。
6.144h二收。1 。pbs洗三次后棄掉pbs，拍干；
2. 加上冷乙醇固定20分鐘（加完放-20攝氏度20分鐘），棄掉上清，不用拍板；
3. pbs洗三次，棄上清，不用拍板，吸干水分；
4. 加入一抗37度半小時，pbs洗三次，吸干水分；
5. 加入二抗37度半小時，pbs洗4 次，觀察顯微鏡。
6.注意事項：pbs洗要溫柔，加入從同一個位點； 做不接毒的空白細胞的對照。
2.（一）病毒過濾無菌后，將三株單抗6d6,12f3,14e6，分別稀釋1k倍，2k倍，2k倍，（可以先將抗體稀釋十倍即10ul抗體加90ul培養基；再將10ul加入2ml豬瘟病毒中），共四個樣，（原毒，原毒加6d6，原毒加12f3，原毒加14e6）。
（二）病毒稀釋十倍后，按照上述步驟將抗體同樣分別稀釋，共四個樣，混勻待用。（原毒稀釋10倍，原毒稀釋10倍加6d6，原毒10倍加12f3，原毒10倍加14e6）
3.將貼壁后的96孔上清棄掉，加入上面8個樣30ul/孔，各四個重復，吸附1h。
4.補液50ul/孔。2%st培養基。
5.96h一收并補液100ul/ 孔。
6.144h二收。1 。pbs洗三次后棄掉pbs，拍干；
2. 加上冷乙醇固定20分鐘（加完放-20攝氏度20分鐘），棄掉上清，不用拍板；
3. pbs洗三次，棄上清，不用拍板，吸干水分；
4. 加入一抗37度半小時，pbs洗三次，吸干水分；
5. 加入二抗37度半小時，pbs洗4 次，觀察顯微鏡。
6.注意事項：pbs洗要溫柔，加入從同一個位點； 做不接毒的空白細胞的對照。
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