雜交瘤細胞培養有關注意事項
細胞株運輸方式:常溫3天
贈送: 5瓶無需飼養層的擴大培養基(冷藏運輸)(民海類胎牛血清)
擴大培養基保存: -20度,內含生長因子。
擴大培養基使用:使用前先用干凈的自來水或者純凈水在干凈的容器里化開并回溫至水溫的溫度 (20-25度),化開后更換水,回溫時間10-20分鐘即可。
細胞凍存: 一個24孔凍存2支細胞,200微升/支 ;
凍存液配方:20%DM胎牛:DMSO=9:1
關于腹水制備: 生長良好的2個24孔 細胞數總量在60W-90W,正好可以打一只小鼠;生長良好的1個6孔 細胞數總量在60W-90W,正好可以打一只小鼠 。一只小鼠可以打50-120W個細胞,根據想要的效價確定細胞數量,一般60W-120W的細胞做出來的腹水效價在10-60W.
注意事項:
1. 收到細胞后先將其擴到1-2個24孔中,5%二氧化碳37度培養箱,靜止培養過夜,待細胞長至80-90%滿時,即可擴大培養,建議首選飼養細胞層,飼養細胞預鋪2-4天,其次用擴大培養基1擴2培養。
2. 融化培養基時,應使用干凈的自來水或者純凈水在干凈的容器里,容器里水面高度務必小于等于瓶內的液面高度,化開期間不要搖晃瓶身,待其完全化開后,立即更換水溫(20-25度)的水,這時的水面可以高于瓶內的液面高度,回溫時間10-20分鐘即可立即使用。
3.胎牛使用 :固定品牌(杭州四季青胎?;蛘呙窈n愄ヅQ寤蛘逩IBCO進口胎牛血清)17-20%濃度使用DMEM培養基。各血清之間不可互換,可以先半換,根據情況再全換。
4. 細胞生長: 細胞擴大時必須等到對數生長期,不要提前或長過延后,即80-90%滿時,即可擴大培養,建議用擴大培養基1擴2培養;如果使用飼養層細胞,不可以用擴大培養基,需要用17-20%濃度的DMEM普通培養基,HT或者無HT均可,無HT優先。