【操作步驟】
1.核酸提取
(1) 取疑似病料(氣管及分泌物、腎臟、肺臟等病毒靶組織),用PBS研磨成1:3懸液,在-20℃凍融1次,經12000 r/min離心3 min,上清液-20 ℃保存備用。
(2)取200uL上清液,移入1.5mL滅菌EP管中,加入200uLSR-I,漩渦振蕩混合均勻,靜置5min。
(3)加75uL TU-1,漩渦振蕩混合均勻,12000r/min離心5 min。
(4)將上清轉移到新的2 ml離心管(試劑盒內提供)中,加入300 uL SR-Ⅳ,上下倒置6-8次,混合均勻。
(5)將步驟4中的混合液移入制備管中(試劑盒內提供),并將制備管置于同一2 ml離心管,8000 r/min離心1min。
(6)棄濾液,將制備管置回到2 ml離心管中,加500 uL SR-II,室溫靜置1min,12000 r/min離心1 min。
(7)棄濾液,將制備管置回到2 ml離心管中,加700 uL SR-Ⅲ,12000 r/min離心1 min。
(8)將制備管置回到2 ml離心管中,12000 r/min離心2min。
(9) 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中(試劑盒內提供),在制備管膜中央加40 uL TU-2, 室溫靜置1 min。12000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板,即用或-20℃凍存備用。