產品介紹
經典豬瘟抗體ELISA檢測試劑盒使用說明書
【產品簡介】豬瘟ELISA檢測試劑盒用于免疫豬瘟疫苗后的抗體動態水平監測，指導免疫預防工作，評估豬瘟疫苗免疫狀況，也可用于該病的流行病學調查。
【產品內容】
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試劑盒成分 |
數量 |
備注 |
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包被板 |
96T×2 |
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陽陰性對照 |
1ml×2 |
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酶標結合物 |
22ml×1 |
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樣品稀釋液 |
40ml×1 |
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底物液 A,底物液 B,終止液 |
12ml×3 |
先加底物液A，更換槍頭后，再加B |
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20×濃縮洗滌液 |
40ml×1 |
用水稀釋到800ml,于4度保存2-6個月，每次用前一天取出放室溫回溫 |
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封口膠，使用說明書 |
2×1份 |
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血清稀釋板，排槍加樣槽 |
2×2個 |
加樣槽請用一次性塑料手套套住，加不同溶液時更換手套，防止不同溶液的交叉污染 |
【用法與判定】
1、需要自備的器材
1.1微量移液器，8道排槍；
1.2 微量移液器配套使用的槍頭；
1.3 用來稀釋洗滌液的500ml量筒；
1.4 酶標儀；
1.5 蒸餾水或去離子水。
2、樣品的制備
2.1 血清的制備：耳緣靜脈取血20微升左右于離心管中，勿晃動離心管防止溶血，置4℃靜置1h，然后1000rpm離心5min，取出淡黃色血清備用，若當天不測，血清應-20℃保存；
2.2 用樣品稀釋液將待檢血清樣品進行100倍稀釋（建議：1μl血清樣品加入99μl樣品稀釋液中），樣品加入包被板前要充分混勻，稀釋不同待檢樣品注意更換槍頭。注意：①制備血清用的血液樣本應無溶血現象發生；②不能稀釋陰性、陽性對照。
3、操作步驟（﹡使用前應輕輕旋轉或震蕩予以混勻，所有試劑應恢復至室溫）
3.1 在A1和B1孔中分別加入100μl陽性對照；
3.2 在A2和B2孔中分別加入100μl陰性對照；
3.3 取100μl經1：100稀釋好的待檢樣品加入其他孔中，并做好記錄；
3.4 37℃孵育20min；
3.5 將各孔的液體棄入廢液桶，每孔加250μl的洗滌液（試劑盒內20×濃縮洗滌液需用蒸餾水或去離子水稀釋成1×后方可使用。如有結晶，需先溶解后，方可進行稀釋）進行洗板，重復3次，每次30s，用毛巾或者紙巾拍干孔內殘余液體；
3.6 每孔加100μl酶標結合物；
3.7 37℃孵育20min；重復步驟3.5；
3.8 每孔先加50μl底物液A，再加50μl底物液B；
3.9 37℃孵育10min（避光顯色）；每孔再加50μl終止液終止反應。
3.10 立刻于450nm波長處測定各孔的吸光度值，即OD450值。
4、試驗有效性判斷
4.1陰性對照：正常情況下，陰性對照孔OD450值≤0.3；
4.2陽性對照：正常情況下，陽性對照孔OD450值＞0.3；
4.3 P/N = 樣本OD/ N值 ,若陰性對照均值小于等于0.1，則N值=0.1+陰性對照均值；若陰性對照均值大于0.1，則N值=陰性對照均值。
4.4結果判定：P/N ≥2 ，判定該檢測樣品為陽性；2≤ P/N＜3 ，判定該檢測樣品為可疑；P/N ＜2，判定該檢測樣品為陰性；P/N ≥3，判定該檢測樣品為陽性
，P/N越大，陽性越強。
4.5若沒有酶標儀，則不需要加終止液目測，只要樣品孔的藍色深度明顯深于陰性對照孔，則判定為陽性，反之為陰性。
【注意事項】
（1）因反應時間短，待檢血清樣品數量過多時，應先使用血清稀釋板將所有待檢血清稀釋完畢后，再統一用排槍將血清樣品加入酶標板中，使反應時間一致。
（2）試劑盒每種試劑，嚴禁交叉污染，吸取不同液體，一定更換槍頭。
（3）加樣槽用前請用一次性塑料手套套住，加不同溶液時更換手套，防止不同溶液的交叉污染。
（4）所有試劑應在2～8℃存放；使用前恢復到室溫，使用后放回2～8℃。
（5）不要使用超過有效期的試劑，不同批次試劑盒的組分不要混用。
（6）操作過程中的移液、計時和洗滌必須精確，取血清時盡量避免溶血發生，溶血嚴重的應重取，以免影響結果。
【規格與包裝】96T×2
【貯藏與有效期】2～8℃避光保存，有效期為12個月。