產(chǎn)品介紹

豬偽狂犬抗體 ELISA檢測試劑盒使用說明書




【產(chǎn)品簡介】豬偽狂犬抗體ELISA檢測試劑盒是采用GB重組蛋白包被，用于檢測疫苗免疫豬抗體水平，指導(dǎo)免疫預(yù)防工作，用于該病的流行病學(xué)調(diào)查。

【產(chǎn)品內(nèi)容】

試劑盒成分	數(shù)量	備注
包被板	96T×2
陽陰性對照	1ml×2
酶標(biāo)結(jié)合物	22ml×1
樣品稀釋液	40ml×1
底物液 A,底物液 B,終止液	12ml×3
20×濃縮洗滌液	40ml×1	用水稀釋到800ml,于4度保存2-6個月，每次用前一天取出放室溫回溫
封口膠，使用說明書	2×1份
血清稀釋板，排槍加樣槽	2×2個	加樣槽請用一次性塑料手套套住，加不同溶液時更換手套，防止不同溶液的交叉污染

【用法與判定】

1、需要自備的器材

1.1微量移液器，8道排槍；

1.2 微量移液器配套使用的槍頭；

1.3 用來稀釋洗滌液的500ml量筒；

1.4 酶標(biāo)儀；

1.5 蒸餾水或去離子水。

2、樣品的制備

2.1  血清的制備：耳緣靜脈取血20微升左右于離心管中，勿晃動離心管防止溶血，置4℃靜置1h，然后1000rpm離心5min，取出淡黃色血清備用，若當(dāng)天不測，血清應(yīng)-20℃保存；

2.2  用樣品稀釋液將待檢血清樣品進(jìn)行100倍稀釋（建議：1μl血清樣品加入99μl樣品稀釋液中），樣品加入包被板前要充分混勻，稀釋不同待檢樣品注意更換槍頭。注意：①制備血清用的血液樣本應(yīng)無溶血現(xiàn)象發(fā)生；②不能稀釋陰性、陽性對照。

3、操作步驟（﹡使用前應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)或震蕩予以混勻，所有試劑應(yīng)恢復(fù)至室溫）

3.1  在A1和B1孔中分別加入100μl陽性對照；

3.2  在A2和B2孔中分別加入100μl陰性對照；

3.3  取100μl經(jīng)1：100稀釋好的待檢樣品加入其他孔中，并做好記錄；

3.4  37℃孵育20min；

3.5  將各孔的液體棄入廢液桶，每孔加250μl的洗滌液（試劑盒內(nèi)20×濃縮洗滌液需用蒸餾水或去離子水稀釋成1×后方可使用。如有結(jié)晶，需先溶解后，方可進(jìn)行稀釋）進(jìn)行洗板，重復(fù)3次，每次30s，用毛巾或者紙巾拍干孔內(nèi)殘余液體；

3.6  每孔加100μl酶標(biāo)結(jié)合物；

3.7  37℃孵育20min；重復(fù)步驟3.5；

3.8  每孔先加50μl底物液A，再加50μl底物液B；

3.9  37℃孵育10min（避光顯色）；每孔再加50μl終止液終止反應(yīng)。

3.10 立刻于450nm波長處測定各孔的吸光度值，即OD₄₅₀值。

4、試驗有效性判斷

4.1陰性對照：正常情況下，陰性對照孔OD₄₅₀值≤0.3；

4.2陽性對照：正常情況下，陽性對照孔OD₄₅₀值＞0.3；

4.3 P/N = 樣本OD/ N值 ,若陰性對照均值小于等于0.1，則N值=0.1+陰性對照均值；若陰性對照均值大于0.1，則N值=陰性對照均值。

4.4結(jié)果判定：P/N ≥2 ，判定該檢測樣品為陽性；2≤ P/N＜3 ，判定該檢測樣品為可疑；P/N ＜2，判定該檢測樣品為陰性；P/N ≥3，判定該檢測樣品為陽性

，P/N越大，陽性越強。

4.5若沒有酶標(biāo)儀，則不需要加終止液目測，只要樣品孔的藍(lán)色深度明顯深于陰性對照孔，則判定為陽性，反之為陰性。

【注意事項】

（1）待檢血清樣品數(shù)量過多時，應(yīng)先使用血清稀釋板將所有待檢血清稀釋完畢后，再統(tǒng)一用排槍將血清樣品加入酶標(biāo)板中，使反應(yīng)時間一致。

（2）操作過程中的移液、計時和洗滌必須精確，取血清時盡量避免溶血發(fā)生，溶血嚴(yán)重的應(yīng)重取，以免影響結(jié)果。

（3）加樣槽用前請用一次性塑料手套套住，加不同溶液時更換手套，防止不同溶液的交叉污染。

（4）所有試劑應(yīng)在2～8℃存放；使用前恢復(fù)到室溫，使用后放回2～8℃。

（5）注意防止試劑盒不同組分受到交叉污染。

（6）不要使用超過有效期的試劑，不同批次試劑盒的組分不要混用。

【規(guī)格與包裝】96T×2

【貯藏與有效期】2～8℃避光保存，有效期為12個月。